高效液相色譜(HPLC)是一種分離液體混合物中各組分的過程,它現在是分析化學中最強大的工具之一。將液體樣品注入流經裝有分離介質(固定相)的色譜柱的溶劑流(流動相)中。當流過色譜柱時,組分通過差異遷移而彼此分離。充分發揮其在中藥樣品分析分離方面的特長,為該領域的進步和發展做出了巨大貢獻。
高效液相色譜是最廣泛使用的色譜分析方法。該系統由流動相儲液瓶、輸液泵、注射器、色譜柱、檢測器和記錄器組成。其整體組成與氣相色譜相似,但根據流動相為液體的特點做了很多調整。HPLC的輸液泵要求輸液量恒定穩定;采樣系統要求采樣方便,開關嚴密;由于液體流動相的粘度遠高于氣體,為了降低柱壓,高效液相色譜的色譜柱一般較粗,長度也比氣相色譜柱短得多。高效液相色譜廣泛應用于定量和定性分析的幾乎每個領域。
使用高效液相色譜系統時,將待測液體物質注入色譜柱,通過壓力在固定相中移動。由于被檢測物種的不同物質與固定相的相互作用不同,不同的物質依次離開色譜柱,檢測器得到不同的峰信號。最后,通過分析和比較這些信號來判斷待檢測物質中包含的物質。高效液相色譜作為一種重要的分析方法,廣泛應用于化學和生化分析中。高效液相色譜系統與經典液相色譜在原理上沒有本質區別。其特點是使用高壓輸液泵、高靈敏度檢測器和高效微粒固定相。適用于分析高沸點、高分子量和不同極性的有機化合物。
高效液相色譜可以分離、鑒定和定量任何樣品中可溶于液體的化合物。今天,痕量濃度低至萬億分之一(ppt)的化合物可以很容易地被識別出來。HPLC可以并且已經應用于幾乎任何樣品,例如藥物、食品、保健品、化妝品、環境基質、法醫樣品和工業化學品。