最近中南大學湘雅醫學院醫學檢驗系研究人員發表論文,目的為建立快速檢測尿液中微量白蛋白的高效液相色譜法,其采用甲酸水溶液與乙腈為流動相的分子篩-高效液相色譜法能較其他方法檢出更多的微量白蛋白,且快速,靈敏度高,適合臨床常規測定。
我們要了解的是,高效液相色譜是色譜法的一個重要分支,以液體為流動相,采用高壓輸液系統,將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱,在柱內各成分被分離后,進入檢測器進行檢測,從而實現對試樣的分析。
此外高效液相色譜還有色譜柱可反復使用、樣品不被破壞、易回收等優點,但也有缺點,與氣相色譜相比各有所長,相互補充。高效液相色譜的缺點是有“柱外效應”。在從進樣到檢測器之間,除了柱子以外的任何死空間中,如果流動相的流型有變化,被分離物質的任何擴散和滯留都會顯著地導致色譜峰的加寬,柱效率降低。
采用新的流動相建立分子篩–高效液相色譜法測定人血清白蛋白標準液和尿液白蛋白,對該法進行方法學性能研究并分析56例糖尿病患者的尿液標本。
色譜柱AgilentZorbaxGF-250以0.1%甲酸水溶液與乙腈(85:15)為流動相,流速1mL/min,檢測波長205nm時,人血清白蛋白標準液和尿液白蛋白均在1.7min出峰。在5~2000mg/L范圍內線性關系良好(r2=0.9969);檢測低限為2mg/L;批內和批間變異系數分別為3.98%和4.05%(20mg/L)、3.55%和3.60%(200mg/L)及4.65%和4.74%(2000mg/L);回收率分別為95.3%,98.1%和97.2%。56例糖尿病患者標本,高效液相色譜法能檢出30例微量白蛋白尿,免疫散射比濁法檢出15例,高效液相色譜法的檢出率明顯高于免疫散射比濁法(P<0.05)。
液相色譜和質譜連接,可以增加額外的分析能力,能夠準確鑒定和定量像細胞和組織裂解液,血液,血漿,尿液和口腔液等復雜樣品基質中的微量化合物。
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