高效液相色譜 (HPLC) 是一項成熟的技術，可根據特定的化學和分子特性將物質混合物分離為其組分。 液體分離基于目標分析物在流動相洗脫液和固定相之間的分布。 固定相包含在高效液相色譜儀的色譜柱中，含有分析物的樣品被注入色譜柱，然后泵送通過流動相流。 當它們通過色譜柱時，組分與固定相的相互作用不同，導致它們在不同的時間從色譜柱中分離和洗脫。 這些分離的物質通常用高性能液相色譜檢測器檢測。  

        一個基本的分析型高效液相色譜系統包括幾個組件，包括一個洗脫液容器、一個泵、一個進樣閥、一個 HPLC 柱、一個檢測器和一個用于色譜數據系統的液體 PC。 小編比較詳細地討論了各個基本液相色譜模塊的工作原理。


高效液相色譜泵和洗脫液罐 

有兩種主要模式用于將流動相泵送通過 HPLC 系統。 當流動相在運行過程中保持恒定時，例如當洗脫液被回收時，使用等度洗脫。 當分離過程中洗脫液的組成發生變化時，使用梯度洗脫系統。洗脫物質的檢測信號稱為峰。 通過適當改變流動相組成，應用梯度可以使色譜圖中的晚峰比等度模式更快地流出。  在梯度洗脫系統中，可以同時使用高壓和低壓梯度 (HPG/LPG)。  LPG 使溶劑能夠從不同的容器中抽取并在泵的吸入側混合，而 HPG 使用多個泵提供單獨的溶劑流以在排出側進行混合。  


 高效液相色譜色譜柱 

 HPLC 色譜柱是本儀器的基礎。 它包含將樣品組分分離為其組成部分所需的固定相介質。 幾何形狀是 HPLC 色譜柱性能的重要指標。 內徑和長度會影響保留率和洗脫時間，固定相的粒徑和化學成分也一樣。 HPLC 色譜柱支持多種分離機制，包括正相和反相、尺寸排阻、離子交換、親水相互作用、親和力等。 穩定的柱溫是獲得可重現分離結果和一致保留的另一個關鍵因素。 使用色譜柱恒溫器的目的是保持穩定的溫度，并確保加熱套和淋洗液加熱器之間的溫度分布均勻。


高效液相色譜儀檢測器和軟件

用于收集峰的檢測器類型由分析物確定。可以使用多種HPLC檢測原理，其中一些原理在這里介紹：紫外檢測器非常常見，但需要從物質分子吸收光譜的紫外部分發出光。當這種物質不吸收紫外線時，就使用RI探測器。這些檢測器用于測量分離分析物隨時間變化的信號峰，但它們只能用于等度應用。一組完整的峰稱為色譜圖。當檢測器將RI或UV信號轉換為電值時，色譜數據系統會產生這種情況。每個不同的峰提供有關分析物的定性和定量信息，然后數據管理系統可以計算樣品的組成。