1.原理
在吸收紫外和可見電磁輻射的過程中,分子受激躍遷至激發電子態,大多數分子將通過與其它分子的碰撞以熱的方式散發掉這部分能量,部分分子以光的形式放射出這部分能量,放射光的波長不同于所吸收輻射的波長。
后一種過程稱作光致發光。分子發光包括熒光、磷光、化學發光、生物發光和散射光譜等。基于化合物的熒光測量而建立起來的分析方法稱為分子熒光光譜法。
由光源發出的光通過切光器使其變成斷續之光,通過激發光單色器變成單色光,此光即為熒光物質的激發光。被測的熒光物質在激發光照射下所發出的熒光,經過單色器變成單色熒光后照射于光電倍增管上,由其所發生的光電流經過放大器放大輸至記錄儀。一個激發,一個發射,采用雙單色器系統,可分別測量激發光譜和熒光光譜。圖
2.分類
熒光光譜儀是測定材料發光性能的基本設備。 通用熒光光譜儀大致可分為3種:
(1) 基本型:在200-800 nm的紫外可見波段的穩態光譜儀。
(2) 擴展型:覆蓋200-1700 nm波段的紫外可見-近紅外穩態光譜儀。
(3) 綜合型:覆蓋上述兩個波段,同時可測瞬態光譜的光譜儀。
3.主要用途
(1)熒光激發光譜和熒光發射光譜;
(2)同步熒光(波長和能量)掃描光譜;
(3)3D(Ex Em Intensity) ;
(4)Time Base和CWA(固定波長單點測量);
(5)熒光壽命測量,包括壽命分辨及時間分辨;
(6)計算機采集光譜數據和處理數據(Datamax和Gram32)。
4.發展歷史
記錄熒光現象的是16世紀西班牙的內科醫生和植物學家N.Monardes,1575年他提到在含有一種稱為“LignumNephriticum”的木頭切片的水溶液中,呈現了極為可愛的天藍色。在17世紀,Boyle(1626—1691)和Newton(1624—1727)等科學家再次觀察到熒光現象。之后熒光引起了許多科學家的研究興趣,熒光分析方法也越來越多的被應用到生物和化學分析當中。
當然熒光分析方法的發展,與儀器應用的發展是分不開的。總體來說,熒光光譜儀自問世以來經過了三個階段的過程:
(1)手動式;
(2)自動掃描;
(3)微機化。
19世紀以前,熒光的觀察是靠肉眼進行的,直到1928年,才由Jette和West提出了一臺光電熒光計。光電熒光計的靈敏度是有限的,1939年Zworykin和Rajchman發明光電倍增管以后,在增加靈敏度和容許使用分辨率更高的單色器等方面,是一個非常重要的階段。1943年Dutton和Bailey提出了一種熒光光譜的手工校正步驟,1948年由Studer推出了臺自動光譜校正裝置,到1952年才出現商品化的校正光譜儀器。