液相色譜法是一種成熟的分離技術，廣泛應用于表征混合物的各種成分。例如，它可用于研究生物反應、在醫學中識別疾病或治療反應的潛在生物標志物、用于環境分析以監測污染物的存在，或用于藥物開發和生產以識別活性藥物成分或篩選雜質。對液相色譜不斷增長的需求推動了該技術的不斷改進和增強，以提供更好、更快的分離。隨著需要以更高的精度完全分離越來越復雜的化合物，超高效液相色譜儀已成為眾多學科的標準做法。

超高效液相色譜

傳統的液相色譜是一項突破，它使混合物能夠分離成不同的部分。這些是通過讓稀釋的樣品在重力作用下通過填充柱來收集的。它主要用作純化技術，因為該過程不易重現。

該過程通過在高效液相色譜儀中使用自動高壓（約 6,000 psi）泵得到增強。隨著技術的進步，隨后可以通過將可施加到 15,000 psi (UHPLC) 以上的壓力來實現更復雜的分離。這部分是通過將色譜柱粒徑減小到僅 3 微米來實現的。此外，UHPLC 中的流通池通常也更小（<1μL，而 HPLC 中為 10 μL），這減少了分散以保持窄的精確峰。因此，UHPLC 可為復雜混合物提供高性能、高速和高分辨率的分離。


UV 檢測通常用于跟蹤洗脫液的目標成分，因為它具有高度精確性 (RSD <0.2%)，可以靈敏檢測低至 0.05% 的痕量雜質。然而，要通過 UV 檢測實現準確定量，物理分離所有雜質非常重要。梯度方法總是用于提高包括不同極性組分的混合物的分離能力，但完全分離需要針對特定??混合物優化每個操作參數，例如色譜柱類型、流動相，這是通過具有挑戰性和時間的方法來實現的。消耗方法開發過程。

多維超高效液相色譜儀

最近，多維高效液相色譜儀分離已被用于實現高度復雜樣品的完全分離，而無需進行復雜的方法開發。多維分離極大地提高了峰容量并能夠更快地獲得結果。除了提高性能外，與單維高效液相色譜儀相比，多維分離還有其他一些優勢。其中包括與目標化合物共流出的雜質的分離、無紫外發色團的雜質的鑒定以及質譜法的使用，后者與用于提高色譜性能的磷酸鹽緩沖液不兼容。


可以在第二維中重新分析整個樣本或僅感興趣的一小部分（Zhang 等，2013a 和 2013b）。許多不同的技術可以串聯使用以獲得樣品的全面輪廓，例如，可以在二維中使用帶電氣溶膠檢測器檢測非紫外吸收發色團，并在三維中使用質譜進行表征（Li等，2014）。