高效液相色譜法（HPLC），以前稱為高壓液相色譜法，是一種分析化學技術，用于分離，鑒定和定量混合物中的每種成分。高效液相色譜法是一種用于化學化合物分析技術，包括生物聚合物，小分子和聚合物。在這種方法中，首先將樣品溶解以制成溶液。然后將此溶液注入包含與樣品相互作用的樹脂的“色譜柱”中。這將減慢樣品通過“柱”的移動，并且當樣品從色譜柱的另一側出來時，將對其進行檢測。這樣，您既可以知道樣品出來的時間，也可以知道檢測到的樣品的強度。


一、高效液相色譜如何工作
1.少量的待分離和測試的樣品混合物通過色譜柱送入流動相中。可以使用不同類型的色譜柱，其中包含不同粒徑和表面的吸附劑。

2.混合物以不同的速度通過色譜柱，并與吸附劑（也稱為固定相）相互作用。混合物中每種組分的速度取決于1）其化學性質，2）色譜柱的性質和3）流動相的組成。特定分析物從色譜柱中出來的時間稱為其保留時間。保留時間是在特定條件下測量的，并被視為給定分析物的鑒定特征。

3.吸附劑顆粒本質上可能是疏水的或極性的。常用的流動相包括水和有機溶劑（如乙腈和甲醇）的任何混溶組合。也可以使用無水流動相。

4.流動相的水性成分可能包含酸，例如甲酸，磷酸或三氟乙酸或鹽，以實現樣品成分的分離。流動相的組成在色譜分析過程中保持恒定或變化。恒定方法對于分離對固定相的親和力不太相似的樣品成分非常有效。在變化的方法中，流動相的組成從低到高洗脫強度都不同。流動相的洗脫強度通過分析物的保留時間來反映，其中高洗脫強度會產生快速洗脫。


二、高效液相色譜注意事項
要清潔系統并使其平衡，您需要運行足夠的溶劑。但是，此數量在列之間有所不同。按照上述步驟操作時，典型的4.6 mm x 30 cm色譜柱應保持清潔。
等度意味著溶劑濃度在整個運行過程中保持恒定。
在樣品之前和樣品之前運行標準品很有用。使用標準品可以輕松確定哪個峰與您感興趣的分子有關。
始終使用HPLC級溶劑。對于經常與抑制劑一起出售的溶劑尤其如此，這也使您檢測目標分子的能力復雜化。


HPLC分配過程與液-液萃取過程非常相似，不同之處在于前者是連續過程，而后者是逐步過程。建議進行試驗分配過程，以確定可以提供足夠分離度的準確HPLC方法。