1.加入有機物后測量流動相

　　校準酸度計，以給出水溶液中正確的酸堿度讀數，即您確認其為水性的緩沖液。如果你在加入有機物的情況下測量pH值，pH值會和加入有機物之前測量的不同。

　　然而，最重要的是保持一致。如果你總是在加入有機物后測量酸堿度，請確保方法中有說明，這樣每個人都可以用同樣的方法來做。不會100%準確，但至少會保持一致。這可能比準確的pH值更重要。
         

　　2.不要使用緩沖

　　有緩沖溶液控制pH值，抵抗pH值的變化。該方法的許多其他部分(如樣品基質、空氣中的CO2、流動相的水源)會改變流動相的酸堿度，導致保留率、峰形和峰響應的變化。
甲酸、TFA等。不是緩沖區。


　　3.緩沖液沒有在正確的酸堿度范圍內使用。

　　每種緩沖鹽都有2個酸堿度單位的寬范圍，其中它提供了最佳的酸堿度穩定性。在這個窗口之外，鹽對于抵抗pH值的變化是無效的。

　　要么在正確的范圍內使用緩沖液，要么選擇范圍覆蓋所需pH值的緩沖液。


　　4.將緩沖液添加

　　將含水緩沖液混合到有機相中緩沖液沉淀的風險很高——在許多情況下，沉淀非常細，可能不明顯。有機物質總是被添加到水相中，這大大降低了緩沖液沉淀的風險。


　　5.用泵混合0%的梯度。

　　現代泵在混合流動相和在線脫氣方面非常有效，但并不是每個最終使用你的方法的人都有高質量的泵。將甲和乙的起始混合物預混合成單一溶液，并在甲線上100%運行。例如，通過將950毫升水溶液與50毫升有機溶液混合，然后過濾和脫氣來制備起始混合物。這降低了高效液相色譜之間的可變性以及系統中氣泡和沉淀的風險。但是，請注意，在泵上混合的95:5不會提供與在瓶中預混合的9533605相同的保留時間。——預混合時，通常需要添加更多百分比的有機物。


　　6.對應的緩沖液。

　　使用正確的酸堿度來調節酸或堿。只使用形成你正在使用的緩沖鹽的酸或堿。例如，磷酸鈉緩沖液只能用磷酸或氫氧化鈉調節。


　　7.方法中沒有說明你的緩沖液的所有信息，比如稱5g磷酸鈉到1000ml水中。

　　緩沖液的類型(一元、二元或三元)決定了緩沖液的酸堿度范圍。所需的摩爾濃度決定了緩沖液的強度。或者5g無水磷酸鈉和5g一水磷酸鈉將具有不同的緩沖強度，并將影響保留。


　　8.用有機物填充管道，無需檢查之前的內容。

　　如果之前的方法在B線使用了緩沖液，而你的方法在B線使用了有機物，那么你很可能會在泵管/泵頭中沉淀緩沖液。我在早期就這樣做了，造成了很多傷害。如有疑問-將其沖洗干凈(80:20水：有機)。


　　9.最后一次支撐瓶子滴出

　　現在是5比5，你幾乎沒有足夠的流動相來運行——。最后幾個樣本就會化為烏有。除了運行泵和干燥色譜柱的風險之外，流動相會從表面蒸發，因此瓶頂部的流動相會改變整體組成。如果你用瓶子里最后的渣滓，從頂部開始的部分就是流過柱子的部分。


　　10.用超聲波對流動相脫氣。

　　這對于確保所有緩沖鹽溶解非常有用，但這是最不有效的脫氣方法，會快速加熱流動相，導致有機物質部分蒸發。我們稍后會解決這個問題-花5分鐘真空過濾您的流動相-脫氣和過濾在一個步驟。