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高效液相色譜儀的工作原理

發布時間:2021-06-23

      高效液相色譜儀是一種強大技術分析儀器,能夠提供更快的運行、更高的分離度以及更高的通量,滿足更多實驗室各種不同應用的需求。高效液相色譜儀系統能夠在運行和數據管理提供了完整的解決方案。

組件
高效液相色譜柱
這也稱為固定相。這是高效液相色譜機器的核心,由多種物質通常二氧化硅中的一種制成,二氧化硅和過量碳反應,碳鏈是非極性的,因此碳鏈越長,色譜柱的非極性越大。含有 18 個碳鏈的色譜柱是常用的,稱為 C18 色譜柱。


高效液相色譜樣品
樣品類型因領域和相關化合物的類型而有很大差異。高效液相色譜可用于分析生物樣本(尿液、血液、唾液和肌肉)、環境樣本、藥物化學(藥物)和微生物學(真菌和細菌產生的毒素)中的化合物。


進樣
將樣品注入高效液相色譜柱。這曾經是手動執行的,經過升級改造后大多數儀器都能實現自動進樣,這樣更高效便捷,減少了手動輸入并允許更高的檢測量。


流動相
這實際上只是水和有機溶劑的混合物。流動相之所以得名,是因為它移動通過色譜柱,同時從色譜柱中洗脫化合物,化合物通常沿濃度梯度洗脫,非極性溶劑的百分比同時增加,流動相逐漸變得更加非極性。


高效液相色譜運行
高效液相色譜可以以多種模式進行。最常用的方法稱為反相,在這種模式下,化合物從極性最強的化合物開始,到非極性化合物結束。對于正相模式,高功率泵將樣品和流動相移動通過色譜柱,運行可能需要 10-60 分鐘。


高效液相色譜圖 
高效液相色譜圖顯示了化合物從化學反應中的分離,色譜圖是在 254 nm 處查看的。兩個主峰出現在 8.20 和 9 分鐘,代表具有這些保留時間的兩種化合物。吸光度單位 (AU) 的數量顯示在 Y 軸上,而運行時間顯示在 X 軸上。


應用
在生物學和醫學領域,高效液相色譜通常用作分析生物和環境樣品是否存在已知化合物(例如代謝物、藥物、毒素、殺蟲劑)的分析工具,并可幫助識別未知化合物。然而,在化學領域,高效液相色譜通常用于監測化學反應以及確定產品的純度。

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