高效液相色譜是一種廣泛使用的分析技術，許多行業和研究領域都非常依賴它。在本文中，您將了解高效液相色譜儀系統的工作原理以及常用的不同類型的高效液相色譜儀機器。其目的是為您提供高效液相色譜儀系統的類型及概述。


高效液相色譜儀 是如何工作的？

高效液相色譜儀 用于定量、鑒定和分離非揮發性液體混合物的成分（揮發性化合物通過氣相色譜法分離）。溶劑從溶劑容器中泵出并與液體樣品混合。溶劑樣品混合物通過高效液相色譜儀柱并進入檢測器，在那里以色譜圖的形式給出電子輸出。廢物收集在機器外部的容器中。


高效液相色譜儀 柱是系統的分離組件。高效液相色譜儀 色譜柱包含具有各種孔徑的“填充材料”，稱為“固定相”。通過孔隙的液體樣品被稱為“流動相”。當流動相通過固定相時，較大的分子會被較小的孔捕獲，從而使較小的分子能夠更快地洗脫 - 這就是分離和分離過程。這會導致較小的分子具有更快的保留時間，而較大的分子具有較慢的保留時間。保留（洗脫）時間是分子到達檢測器所需的時間。保留時間是根據已知標準測量的，因此可以識別樣品中的分子。分子在柱子中停留的時間越長，色譜圖上的峰越寬（和越不尖銳）。流動相的內部壓力也可以達到 400 個大氣壓。


高效液相色譜儀有哪些類型？

高效液相色譜儀 主要有 3 類：正相 高效液相色譜儀、反相高效液相色譜儀和超高效液相色譜儀(超高效液相色譜儀)。

盡管有名稱，正相高效液相色譜儀并不是最常用的高效液相色譜儀方法。正相高效液相色譜儀使用非極性溶劑作為流動相，硅膠顆粒作為固定相。在常規高效液相色譜儀中，與非極性化合物相比，極性化合物在固定相中會更長時間地粘附在極性有機硅上。因此，非極性化合物在正常高效液相色譜儀中的洗脫速度更快。孔徑一般在3微米左右。

反相高效液相色譜儀是最常見的高效液相色譜儀類型。在反相高效液相色譜儀中，固定相被烴鏈（通常長 8-18 個碳）改性，導致色譜柱變為非極性。也使用極性溶劑。在反相高效液相色譜儀中，樣品中的極性分子會與溶劑產生強烈的吸引力，從而使它們更快地洗脫。它們也不會與非極性固定相相互作用。非極性化合物會與固定相產生范德華力和分散相互作用，因此它們的洗脫速度較慢。

與高效液相色譜儀相比，超高效液相色譜儀 運行速度更快、使用的溶劑更少且分辨率更高。色譜柱也更小，固定相顆粒的尺寸要小得多。較小的孔（亞 2 微米）促進了分子更好的分離和分辨率。較短的色譜柱還可以進行快速檢測。然而，超高效液相色譜儀 不能用于干燥或未過濾的樣品，因為較小的孔會堵塞，這是一個昂貴且耗時的修復過程。

填料材料的新進展已經開始在高效液相色譜儀和 超高效液相色譜儀 之間創建中間解決方案。核殼顆粒是目前市場上的一種此類填充材料。使用核殼顆粒的效率與使用亞 2 微米顆粒的效率相同，但可以在低得多的壓力下運行。甚至有人猜測這些效率可以在標準高效液相色譜儀機器上產生。

高效液相色譜儀 機器通常包含一個紫外線檢測器來測量樣品中分子發出的紫外線。但是，某些高效液相色譜儀機器可以與質譜儀 (MS) 結合使用。使用 高效液相色譜儀-MS 機器時，可以通過 m/z 比來識別分子，而無需知道保留時間。