我們在操作高效液相色譜儀過程中首先要了解儀器的主要部件結構以及它的功能原理，方便我們在操作過程中避免出現錯誤的操作。下面我們就來認識一下它的主要組件。


泵：

泵的作用是推動（強制）液體（流動相）以特定流速通過色譜儀，以毫升/分鐘表示。高效液相色譜儀中的正常流速為 1-2 ml/min，典型的泵可以達到 2000 – 9000 psi 的壓力范圍，但在U高效液相色譜儀模式下的應用中，操作壓力可能高達 15000-18000 psi。正常流量穩定性必須< 1%。


理想的泵應具有以下特點：

溶劑相容性和耐腐蝕性
不受背壓影響的恒定流量輸送
低死體積，最大限度地減少溶劑轉換問題
用于 HPLC（或 LC）的主要泵類型如下：


恒壓泵：利用來自氣瓶的壓力提供通過色譜柱的一致連續流速。
恒流泵： a) 往復活塞泵通過活塞在液壓室中的往復運動輸送溶劑。往復泵的主要缺點是它會產生脈動流。對于流量敏感的檢測器，如微吸附檢測器，必須使用脈沖阻尼系統，并降低檢測器的靈敏度。b) 注射式泵適用于小口徑色譜柱。通過電動螺旋裝置將恒定流速輸送到色譜柱。
泵應對溶劑、緩沖鹽和溶質呈惰性。它們由不銹鋼、鈦??和抗性礦物制成。


有兩種類型的泵操作：


等度泵- 提供恒定的流動相組成
梯度泵——提供可變流動相組成


注射器：


樣品應作為塞子引入，而不會干擾色譜柱填料。進 樣器用于將液體樣品引入流動相的流動流中。典型的樣品體積為 5-20 μL。進樣器必須能夠承受流動相的高壓。預柱是一小段可拆卸的管子，含有與色譜柱相同的填料，可在分析柱之前使用，以防止后者受到污染。預柱還充當緩沖液以防止進樣過程中填料竄流。



有四種用于高效液相色譜儀柱：


高性能分析柱[內徑（內徑）1.0-4.6 mm；長度 15 –250 mm] - 主要用于定性和定量分析
制備柱（內徑 > 4.6 毫米；長度 50 – 250 毫米）——主要用于制備工作
毛細管柱（內徑 0.1 -1.0 mm；各種長度） 
納米柱（內徑 < 0.1 毫米）



用于構建柱的管道可以是：


玻璃——主要用于生物分子
不銹鋼——最受歡迎；能承受高壓
PEEK 聚合物 – 對大多數溶劑呈化學惰性且具有生物相容性
色譜柱填充有小直徑多孔顆粒。通常使用的多孔材料的尺寸為 1.6 – 5 μm。液/固色譜（LC、HPLC）中使用的柱填料是硅膠、活性炭和氧化鋁。大多數用戶購買預裝柱以用于他們的液相色譜儀。色譜柱中的這些多孔顆粒通常在其表面具有化學鍵合相，該相與樣品組分相互作用以將它們彼此分離——例如，C18 是一種流行的鍵合相。樣品組分的保留過程取決于柱填料的選擇和流動相的選擇，以推動分析物通過填料柱。