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液相色譜儀峰拖尾系統故障排除

發布時間:2021-07-19

               


奇怪形狀的峰代表了LC/HPLC實驗室中可能出現的最常見問題之一 。首先應該解釋為什么拖尾不好:
帶有拖尾的峰很難整合
與良好的色譜法相比,涉及失真(帶拖尾的峰)的分析方法的精確度和可靠性通常較差
當峰出現拖尾時分辨率低
 峰拖尾的另一個原因是使用錯誤的溶劑溶解樣品。



樣品溶劑錯誤
當用于溶解樣品的體積和溶劑種類不合適時,會觀察到峰拖尾。理想情況下,應注入少量樣品(溶解在流動相中)。但是,當相對較大體積的比流動相強的溶劑與溶解的樣品一起進樣時,色譜圖會受到嚴重影響。這顯示在圖1a,其中30 μ溶于乙腈的雙組分的樣品中的L 18%乙腈/水流動相被注入。出現兩個拖尾和扭曲的峰。當相同的樣品溶解在 18% 的乙腈/水中時,會出現兩個正常峰。




將 30 毫升樣品注入乙腈中。使用 18% 乙腈/水作為流動相的反相分離 b) 與 (a) 相同,但樣品溶解在流動相中并出現 2 個正常峰。
從上面的討論看來,選擇溶解樣品的溶劑應該使用以下程序:


 最好的選擇是將樣品溶解在流動相中并注入 10-50 μ L
或者,在反相 LC 的情況下,可以注入更大體積的弱溶劑,即 100-500 μ L 溶解在水中的樣品。一個主要的缺點是在色譜圖的開頭出現了更大的基線顛簸。  
較大的體積(100-500 μ溶解在流動相中的樣品L)也可使用,但分辨率可以特別苦為早期洗脫峰
在情況下,上述不工作,作為最后的手段10-25 μ比流動相更強的溶劑的L可被使用。 


柱外效應


對于設計良好的 LC 系統,由于柱外體積導致條帶拖尾的主要原因通常是檢測器流通池。一些檢測器允許替換較小體積的流通池,這會減少條帶拖尾,但也會降低檢測器的靈敏度。在某些情況下,連接管可能太長或其內徑太大。可以用 0.007 英寸內徑的管子代替它來解決這個問題。


LC 中的帶前沿(圖 2)可能是由柱溫問題引起的,尤其是在環境溫度下的離子對色譜中。在這種情況下,在較高溫度 (~45 C) 下重復分離通常可以消除問題。40-50 C 的溫度通常有利于離子對色譜,因為更窄的譜帶和更好的分離結果。


離子對色譜中前沿譜帶的另一個來源是使用非流動相的樣品溶劑。通常,在離子對色譜的樣品-25?30 μ升 -應該只被注入作為移動相的溶液,以避免帶繞前和其他問題。


通過正相或離子交換色譜進行的分離涉及樣品分子與柱填料表面的特定位點的結合。例如,陽離子交換劑上的磺酸鹽 (-SO3 - ) 基團或二氧化硅上的硅烷醇 (Si-OH) 基團。通常,這些站點并不完全相同。一些位點位置優越,可與樣品分子發生強相互作用。樣品分子將優先選擇最強的保留位點,并且將首先使用這些位點。因為這些強位點通常以低濃度存在,所以它們很快被樣品占據,因此只有較弱的位點可用。
強保留位點的另一個特點是它們通常會吸引強保留的樣品分子。這意味著過早的色譜柱過載主要發生在色譜圖中較晚的洗脫條帶上。因此,結果是色譜圖中的最后一個條帶顯示條帶拖尾。
這種由于強保留位點導致的離子交換或正相 LC 中的條帶拖尾有時可以通過使用較少的樣品來減少。更有效的方法是增加流動相的強度。

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