氨基酸通常用高效液相色譜法分析。然而，也可以使用液相色譜，在某些情況下，出于儀器可用性或運行成本的考慮，這種方法將是更好的選擇。在進行液相色譜分析之前，有必要對氨基酸的極性進行衍生。衍生化旨在使分析物更易揮發，反應性更低，從而改善其色譜行為。對于氨基酸，衍生化用非極性基團取代了OH、NH2和SH極性官能團上的活性氫。

　　甲硅烷基化是一種非常常見的衍生技術，可用于多種化合物。這種方法的主要缺點是對水分敏感。如果有水，可能會導致反應產率低和衍生分析物不穩定。本研究對甲硅烷化試劑N-叔丁基二甲基甲硅烷基-N-甲基三氟乙酰胺在氨基酸衍生化中的應用進行了評價。當與含有活性氫的極性官能團反應時，MTBSTFA形成叔丁基二甲基甲硅烷基(TBDMS)衍生物：

      

　　MTBFA衍生物比使用較低分子量試劑形成的衍生物更穩定，對水更不敏感，如N，O-雙(三甲基甲硅烷基)三氟乙酰胺(BSTFA) 。


　　實驗

　　將含有91g/mL  L-氨基酸和0.1 N  HCl混合溶液的50 L等分試樣，加入100 L純MTBSTFA，然后加入100L乙腈。混合物在100加熱。持續4小時。然后，樣品用碳酸氫鈉中和，在20米 0.18毫米內徑0.18微米SLB-5質譜毛細管柱上進行氣相色譜-質譜分析。


　　結果

　　氨基酸的三丁基錫化合物衍生物的色譜圖如圖2所示。從該峰獲得的光譜數據有助于識別氨基酸衍生物。用三丁基錫化合物取代活性氫，分子量增加了114。這些衍生物的電子碰撞光譜2包含對應于衍生物分子量降低的典型片段CH3(M-15)、C4H9(M-57)、C4H9 CO  (M-85)和CO-O-TBDMS  (M-159)。圖3顯示了TBDMS-纈氨酸光譜中這種片段模式的例子。
            

　　在所用的反應條件下，大多數氨基酸產生一種衍生物，羥基、胺基和巰基(在半胱氨酸的情況下)中的活性氫被三丁基錫化合物取代。一些氨基酸產生各種衍生物，尤其是天冬酰胺、谷氨酰胺和色氨酸。對于上述氨基酸，反應條件的改變，如降低溫度或改變反應時間，可以防止這種情況的發生。例如，將反應時間從2小時增加到4小時會導致完全衍生的色氨酸的反應增加。盡管三丁基錫化合物衍生物比傳統的三丁基錫化合物衍生物更穩定，但其較高的分子量導致氣相色譜分析中的洗脫時間更長。為了平衡這一點，使用更短更細的毛細管柱進行分離。為了保持甘氨酸衍生物峰在溶劑中的分辨率，起始溫度不高于100。胱氨酸衍生物洗脫后，迅速升溫至360，保證色譜柱清潔，便于后續分析。


　　結論

　　研究表明，適當使用衍生化試劑，如甲基叔丁基醚，可以用氣相色譜-質譜聯用技術分析氨基酸。為了實現目標衍生物的最大響應，可能需要“調整”反應條件。衍生物可以形成用于質譜鑒定的特征片段。為了減少這些衍生物的總氣相色譜分析時間，建議使用更短和更薄的色譜柱，如20 m  x  0.18 mm內徑x  0.18微米SLB-5 ms