殘留物被認為是存在一個小的分析物峰，在進樣后注入空白時會出現，這個峰會產生一個相同分析物的大峰。當這種情況發生時，可能會在隨后的色譜圖中觀察到以前分析過的樣品的峰，這些峰可能會與所需的分析物同向流動或發生干擾。如下所示，空白質譜揭示了目標分析物的輪廓。這是高效液相色譜中最令人沮喪的問題之一。


　　1.分類結轉。

　　經典還是不變。


　　經典殘留物觀察到的結果是，當空白連續注射時，殘留峰的大小有規律地減小。例如，第一個空白峰可能是原始大小的1%，然后下一個空白峰又下降了100倍。這種承載通常是由流路中的機械區域引起的(例如，閥頭中的兩個表面，管道插入其中，螺母被型鍛)。在空白進樣期間，一些樣品的保留會逐漸稀釋，導致每次空白運行期間的殘留量逐漸減少。


　　連續結轉-不是真正的結轉。所有樣品和空白總是有一個小峰值，不會隨著每次空白運行而減少。這是一些污染源造成的。如果污染物峰值似乎隨著空白進樣量的增加和減少而增加或減少，則空白很可能被污染。如果不是，污染源在系統的其他地方。


　　第三，考慮“空注”操作的重要性。島津自動進樣器提供獨特的空采樣能力，無需采樣或旋轉自動進樣器的采樣閥或高壓閥即可開始色譜操作。這個簡單的測試可以幫助確定問題的根源是否是注射事件本身。不產生不符合要求的峰的空運行必須表明自動進樣器進樣事件是問題的根源。它不能證明自動進樣器中殘留物的來源，但它確實將問題縮小到了高壓閥(人乳頭瘤病毒)、其接頭和連接色譜柱的出口管。由于島津自動取樣器采用針流道設計，


　　2.更換空白并改變注射量。

　　一件重要的事情是排除空白本身是否可能被污染。檢查的一個簡單方法是使用不同的基質來源來制備新的空白(即溶劑本身可能被污染)。此外，改變進樣量也有幫助——如果空白的進樣量增加，殘留峰的峰面積也增加，則強烈表明空白被污染。如果您注意到殘余峰的大小保持不變，則殘余物很可能位于針頭外部(請參考外部自動進樣器沖洗說明)。如果您注意到殘余峰的大小隨著每次后續注射而減小，則殘余物很可能位于針和/或樣品環內(請參考沖洗內部自動進樣器的說明)。


　　3.不包括色譜柱。

　　色譜柱可能是殘留物的來源，尤其是當隨著時間推移出現結垢時。重復注射含有耐火材料或強保留成分的樣品，每次注射都會慢慢改變色譜柱粘結相的特性。梯度條件可能無法有效清潔此類材料的色譜柱，隨著時間的推移，問題可能會惡化。問題列的一個簡單測試是將其從系統中移除，并用零死體積替換。正常運行樣品，注意沒有色譜柱保留和區分樣品成分。跟著它跑一兩次。結轉是否繼續？如果是，問題就和硬件有關。如果沒有，問題出在柱子上，你應該換掉它。另一個實驗可以顯示柱子是否產生殘留物。創建一個方法，使泵通過雙梯度，如下圖所示。從注射開始。該程序從低強度洗脫液條件轉移到高強度洗脫液條件，以高強度沖洗色譜柱，然后返回初始條件幾分鐘。然后重復相同的梯度，但不會發生新的注射。以這種方式，柱床通過溶劑強度梯度，以觀察殘余峰是否再次產生。如果是，這可能表明填充床或入口篩板是交叉污染的來源，這可能需要更主動和更頻繁的柱沖洗。


　　4.檢查流路接頭。

　　程序通常僅限于人乳頭瘤病毒的連接器和檢測器下游的所有連接器。不銹鋼接頭幾乎沒有問題，但是PEEK接頭和管道在高壓下會滑動。例如大于約4000磅/平方英寸。你可以用扳手稍微擰緊不銹鋼配件來檢查它們。聚醚醚酮接頭和管道的最佳方法是關閉泵，松開每個接頭，將管道牢牢推到噴嘴底部，然后重新擰緊接頭。


　　5.檢查自動進樣器沖洗階段的溶劑。

　　吹掃自動進樣器，這是一個預防性步驟，以確保通向自動進樣器的所有沖洗管線都用沖洗溶劑計量，而不是用空氣填充。由于管道中的空氣，針頭或密封件可能沒有被正確沖洗。

　　使用新鮮的沖洗溶劑-用新批次的溶劑替換沖洗階段的溶劑，并用干凈的溶劑替換沖洗階段的容器。更換沖洗溶劑后，在沖洗或沖洗循環中循環自動進樣器幾次，以確保前一沖洗階段的所有溶劑痕跡都已清除。


　　調整沖洗階段的強度。

　　強洗階段是對導致殘留物的樣品成分具有親和力的階段。對于強有機溶劑的反相色譜，在洗滌混合物中使用更多的有機溶劑，以確保有效洗滌。通常，使沖洗階段的化學物質與流動相的強度大致相等是有效的。有時值得考慮使用100%強溶劑(通常是乙腈或乙醇)。異丙醇是許多應用的優秀洗滌溶劑，例如脂肪酸，并且已經證明在去除污染物方面比甲醇或乙腈更有效。


　　c  .調節沖洗的酸堿度。


　　考慮到漂洗階段的pH值是一種化學“強度”。在某些情況下，殘留分析物可能對洗滌階段的酸堿度非常敏感。避免使用酸堿度緩沖液或鹽來沖洗混合物，否則蒸發后會留下殘留物。切勿使用磷酸鹽緩沖液。使用揮發性pH調節劑，如LCMS流動相，如甲酸、乙酸、甲酸銨、乙酸銨或氫氧化銨。通常0.1-1%體積的溶液就足夠了。嘗試在洗滌溶劑中加入酸或堿，看看殘留物是否得到改善。6.啟用自動取樣器沖洗機制。


　　在注射前后啟用針頭沖洗。有關沖洗類型和操作原理的具體信息，請參考本文件末尾的部分。多種沖洗選項允許將強/弱沖洗化學品組合用于外部針頭表面沖洗和內部注射機構沖洗。

　　解決高效液相色譜殘留問題-清潔度。

　　7.更換硬件:更換針頭、針頭墊片、注射環或人乳頭瘤病毒轉子。

　　如果您仍在嘗試解決剩余問題，則問題很可能與自動進樣器硬件有關。此時，您應該更換零件，直到發現問題。通常，最簡單的第一步是嘗試手動進樣閥，或者用不接觸目標化合物的自動進樣器替換自動進樣器。如果這些方法中的任何一種解決了問題，就可以確認問題出在自動進樣器上，值得沿著這條路線進行進一步的故障排除。如果您還沒有這樣做，請更換自動進樣器人乳頭瘤病毒上的針頭墊圈，這在許多情況下是罪魁禍首。如果這不起作用，考慮更換針頭和樣品環。


　　由于樣品和進樣溶劑的特性，有時樣品會吸附在樣品環上。用不同的組合替換循環可以幫助解決這個問題。注射環由不銹鋼和聚醚醚酮制成。新的環材料和不同注射溶劑的組合應消除樣品在環上的吸附。


　　第三，作為做生意的正常結果，人乳頭瘤病毒的內部構件會隨著時間的推移而磨損。磨損的轉子可能是殘留物的來源，但它通常會影響色譜峰的質量。考慮修理或更換人乳頭瘤病毒。


　　8.解決具體樣品的遺留問題。

　　到目前為止，您已經嘗試了所有簡單的方法來解決剩余的問題，因此值得花時間檢查問題是否針對您的樣品。有時，您可以通過檢查樣品中的另一個峰來進行檢查。例如，如果您的方法使用內部標準，請嘗試注入大量內部標準，然后注入沒有內部標準的空白。也許你可以注射另一種化學相關的化合物，在目前的方法條件下會被洗脫。如果所有其他方法都失敗，您可以更換流動相或色譜柱并運行另一種方法。如果您發現殘留問題在不同的化合物或方法條件下很常見，則很可能是與自動進樣器硬件或系統流程相關的物理問題。