科學家使用
高效液相色譜儀分離化合物混合物,通常該方法包括將樣品注入色譜柱,并與一種或多種溶劑混合。不同化合物對柱子的吸附或粘連程度不同的溶劑推動化合物通過柱子時,混合物中的一個成分首先離開柱子。儀器在化合物離開光譜柱時進行檢測,生成光譜圖,該光譜圖由一個圖構成,x軸為了保留時間,yt軸為檢測器的信號強度。化合物離開柱子時,在柱子圖中產生峰。一般來說,色譜圖中的峰值距離越遠越窄,分辨率越高。科學家認為分辨率為1。
通過記錄每個峰底部的 x 軸值,測量色譜圖中兩個相鄰峰的寬度。x 軸代表保留時間,通常以秒為單位。因此,如果峰值從 15.1 秒開始并在 18.5 秒結束,則其寬度為 (18.5 - 15.1) = 3.4 秒。
通過記錄時間,即 x 軸上的位置來確定保留時間,該位置對應于峰值的位置。該值通常位于用于計算步驟 1 中寬度的兩個值之間。例如,步驟 1 中給出的示例將在大約 16.8 秒處顯示最大值。
通過以下方式計算兩個峰之間的分辨率 R:
其中 RT 1和 RT 2代表峰 1 和 2 的保留時間,W 1和 W 2代表在其基部獲得的峰的寬度。繼續步驟 2 和 3 的示例,一個峰的保留時間為 16.8 秒,寬度為 3.4 秒。如果第二個峰的保留時間為 21.4 秒,寬度為 3.6 秒,則分辨率為: