高效液相色譜(HPLC)和超高效液相色譜(UHLPC)是兩種最流行的液相色譜技術。高效液相色譜和UHPLC有一個填充在色譜柱中的固定相,液體流動相通過色譜柱。感興趣的組分根據極性進行分離,選擇的色譜柱和流動相取決于用于分析的色譜方法。
根據填料和顆粒技術,HPLC和UHLPC色譜柱可分為不同的類別。根據要分離分析的內容,每個列類別都有幾個優點和缺點。
全孔色譜柱
多孔球形二氧化硅顆粒廣泛用于高效液相色譜和UHPLC。多孔顆粒像海綿一樣工作,當它們與固定相相互作用并導致分離時,樣品擴散進出孔隙。
使用全多孔色譜柱的優點和缺點是:
優勢
提供多種固定相。
高機械強度
良好效率
適用于較高的pH值
劣勢
二氧化硅在pH 7.5以上的溶解度
pH值小于1.5時鍵的水解
殘留的硅烷醇活性將導致峰拖尾。
多孔色譜柱的一些缺點可以通過改性來克服。硅氧烷橋可以被硅氧烷橋如乙烷鍵取代,以延長色譜柱在較高pH值下的使用壽命。
核殼柱
核殼色譜柱包含核殼顆粒,也稱為表面多孔顆粒。色譜柱具有內部固體二氧化硅不可滲透的核心,該核心被形成外殼的外部二氧化硅多孔層包圍。多孔顆粒和核殼顆粒之間的一個很大的區別是擴散僅發生在顆粒的多孔外層,而不是整個顆粒。
使用核殼色譜柱的優點和缺點是:
優點
柱長,柱效更高。
快速分析時間
與全多孔顆粒相比,靈敏度更高。
劣勢
方法轉移可能很耗時。
需要能在高壓下工作的特殊儀器。
整體柱
最后一種色譜柱是整體柱。整體式色譜柱由單個多孔硅膠或有機聚合物制成,而不是許多小硅膠顆粒。單棒具有明確的中孔和大孔結構。大孔類似于顆粒填充柱的間隙體積。大孔決定了柱子的滲透性。整體柱的中孔位于二氧化硅顆粒的表面或二氧化硅骨架中。
使用整體柱的優點和缺點是:
優勢
高孔隙率導致低壓
只需要少量的樣品制備。
微孔結構可以直接注射。
適用于臟樣品。
不會因為換床而不穩定。
劣勢
可用的固定相不多
不如全多孔色譜柱有效。
存在已知的再現性問題。