液相色譜 (LC) 是一種先進的分析技術,在生命科學和有機化學領域無處不在。它用于將混合物分成各自的化學成分,以便對這些成分進行可靠的分析。大多數化學家都會在一定程度上熟悉液相色譜儀器的使用方法,無論是常規高效液相色譜 還是更專業的快速蛋白質液相色譜。
液相色譜原理概述:分析物:要分離和分析的化學混合物。
親和力:分析物中化學物質與固定相之間的粘附強度,通常由吸附和溶解度決定。
流動相:分析物分散在溶劑中,然后通過液相色譜柱。
固定相:色譜柱內的靜態物質,導致流動相中的組分分離。
洗脫:流動相通過固定相的過程。
液相色譜與氣相色譜的不同之處在于其液體流動相。通常,溶劑或溶劑混合物用作分析物的載體,分析物通過填充到柱中的固定介質。分析物中的各種化學物質與該固定相的親和力不同,會與固定相發生不同的反應,從而導致不同的洗脫和保留速率(分析可以手動進行,但集成光學檢測器更常用于現代應用)。這些記錄分析物的成分何時從色譜柱中洗脫為一系列峰,用于生成液相色譜圖。這為樣品組成提供了可靠的定量和定性洞察。不同的洗脫速率是液相色譜成功的基礎。這是由分子對固定相的吸附和分子在流動相中的溶解度決定的。這些特性是流動相和固定相的電化學和物理特性的函數,主要是極性和尺寸。
液相色譜系統中的組件液相色譜有無數種類型(生物親和、離子交換、反相、正相、尺寸排阻等),但它們中的每一種通常都基于相似的基本原理和相似的基本組件進行操作。
最簡單的儀器形式包括位于燒瓶或容器下方的液相色譜柱。選擇色譜柱時要牢記的注意事項通常是幾何形狀(直徑、長度等),而使用的固定相類型通常取決于您的液相色譜應用。例如,固體硅膠珠將分子保留在液體流動相中作為吸附的函數,而離子交換樹脂則用于離子交換液相色譜。當分析物從色譜柱中流出時,它會流過檢測器進行分析并記錄在液相色譜數據系統中。