在高效液相色譜系統中，一切都是相互關聯的。一個具體的問題沒有普遍的解決辦法。當然，高壓液相色譜的壓力是完全正常的。這是洗脫液的背壓，洗脫液通過非常窄的毛細管被泵送到緊密填充的色譜柱。那么，會出現什么問題呢？非常多！


　　高效液相色譜系統的壓力變化可能有許多不同的原因，通常與其他典型的高效液相色譜問題有關。因此，解決壓力問題并不容易，尤其是因為它必須首先被識別。峰展寬、雙峰、鬼峰、強基線噪聲或保留時間變化的出現通常是一個壓力問題。所以，壓力總是值得關注的。因此，定期檢查壓力可能會防止這些問題的發生。


　　只有定期監控壓力，才能檢測到特殊的蠕變壓力變化。因此，應定期記錄高效液相色譜系統的背壓，最遲在每次更換保護柱時。始終建議使用保護柱，即使在檢查“干凈”樣品時也是如此：高效液相色譜泵的正常材料磨損可能足以損壞色譜柱的耐用性。測定背壓的最佳方法是標準化的高效液相色譜操作，這種方法不會改變。原則上，你應該時刻注意壓力，甚至——或者特別是——在常規測量中。為防止與壓力相關的色譜柱或設備損壞，應在HPLC軟件中設置最大壓力，超過壓力時泵會自動關閉。在這種情況下，


　　那么，你的高效液相色譜系統有壓力波動嗎？


　　尤其是在你做日常工作的時候，你可能會忽略那些顯而易見的事情。因此，首先檢查系統是否連接正確(是否所有毛細管都已連接，是否有泄漏？)。流動相是空的嗎，有沒有吸入空氣？泵頭中的泄漏和空氣會導致壓力非常低或沒有壓力。另一個簡單的解釋可能是流速設置得太低，流速太高會導致壓力太高。根據塔的大小，有一個特定的理想流速是最合適的。流速過高會損壞色譜柱。


　　一次操作中的一些壓力波動是正常的


　　特別是在梯度操作期間，可能會發生壓力變化，這可以用溶劑及其混合物的粘度來解釋。當混合時，水與甲醇或四氫呋喃(THF)的梯度顯示壓力急劇增加。這個壓力不可低估(50%甲醇/50%水的壓力是100%甲醇的兩倍以上)，建立新方法時要做好監測，防止損壞設備或色譜柱。務必確保所用的洗脫液相互混溶！通過無注入運行和記錄壓力波動來確定梯度的典型壓力變化。通常，您還可以看到基線漂移，這對于某些漸變是正常的。在某些情況下，注射后會立即觀察到壓力峰值。這對于大注射量可能是正常的。注入過程中新增加的體積將導致暫時過壓。如果是高粘度的溶劑，壓力可能會在短時間內上升兩次以上。如果可能，使用與所用溶劑成分相同的樣品溶劑(運行開始時)。


　　注入樣品溶劑(“空白”)以測量壓力變化。如果注射樣品的壓力值明顯高于單個空白的壓力值，則應提前過濾或純化樣品。


　　在等度系統中，正弦壓力變化來自哪里？


　　我們剛剛闡明了梯度操作中的壓力變化。在梯度操作中，壓力可能在操作過程中增加，并在接近終點時降低。梯度系統中的這種壓力變化模式與主要在等度系統中觀察到的規則“正弦”模式非常不同。基線的正弦模式經常伴隨著它。當流量增加時，壓力振蕩的頻率也增加。因此，問題出在泵上。泵頭中可能有氣泡。這種空氣可以通過一種叫做通風的簡單程序釋放出來。如果排氣未能成功解決問題，背壓不足可能是這些波動的原因。由于泵的運動，背壓損失將導致壓力波動。所以，


　　如果問題持續存在，泵的閥和密封件可能會因磨損而泄漏，應予以更換。但是在你下昂貴的訂單之前，你應該檢查一下色譜柱：長時間不用的色譜柱可能會在儲存過程中變干，并在重新連接時引起這種壓力波動。


　　壓力太大？


　　如果壓力過高，應首先檢查預柱是否需要更換。此外，您應該檢查上次運行了哪些樣本。可能是懸浮顆粒和雜質混合在樣品中，導致注射系統或單一毛細管堵塞。在這種情況下，如果您不想冒著堵塞毛細管系統或保護色譜柱的風險運行少量樣品，您應該考慮過濾、離心或預純化樣品(例如，固相萃取)。使用的溶劑也可能是原因：特別是，自混合水相必須很好地過濾，以減少細菌生長并去除懸浮顆粒。對于鹽等添加劑，確保一切都很好地解決，沒有任何沉淀。


　　在開始拆解整個系統之前，我們也來檢查一下顯而易見的事情：流量是否設置過高？是否使用高粘度溶劑混合物(例如甲醇/水50:50)？即使烤箱的溫度太低，壓力也會增加。


　　如果更換預柱沒有幫助，高效液相色譜系統可能會堵塞。對于受影響成分的定位，最好通過反轉來更換單個成分：從出口毛細管開始，從檢測器通向廢液罐，然后更換色譜柱和檢測器之間的毛細管。如果有新的列可用，請替換它。然后連接噴油閥或自動噴油器。如果這里的壓力仍然太高，問題出在泵上。你應該咨詢技術人員。壓力太低怎么辦？


　　特別是，壓力的輕微下降經常被忽略。在維護不當的情況下，過低的壓力可能會被堵塞的毛細管或保護柱掩蓋，從而無法檢測到。這通常發生在其他問題中，例如重現性和回收率差，以及強基線噪聲。如果定期檢查和記錄基礎壓力，很容易觀察到輕微的壓降。


　　在任何情況下，如果壓力下降，應檢查所有連接是否有泄漏。持續的低壓可能是泵系統出現小泄漏或氣泡的跡象。不要忘記明顯的原因，例如低流速或不同的柱溫。即使溶劑瓶中的抽吸過濾器堵塞，壓力也會降低。如果可以排除泄漏，則系統中可能有空氣，通常還有基線噪聲和漏峰。


　　如果出現突然而強烈的壓降，應立即檢查泵是否吸入空氣或毛細管是否滑出接頭并導致大量泄漏。