高效液相色譜是一種分析技術，其中樣品(通常是有機化合物的混合物)溶解在溶劑中，然后注入色譜柱。樣品組分和柱的固定相之間的相對親和力導致樣品組分的分離，然后可以通過各種檢測器檢測樣品組分，并通過將每個峰的強度與參考標準校準曲線進行比較來定量。

　　高效液相色譜變化

　　原則上，它非常簡單，并且可以調整廣泛的變量來優化色譜分離。廣義而言，高效液相色譜分離可分解為：

　　正相：極性固定相；根據極性分開。
　　反相：非極性固定相；基于疏水相互作用的分離。
　　尺寸排阻(GPC):多孔固定相；基于流體力學體積的分離。
　　離子交換：帶有離子電荷的固定相；基于離子電荷的分離。


　　并且在每種方法中，許多變量可以被調整以顯著影響靈敏度和色譜分辨率，例如流動相(和流動相之間的梯度)、色譜柱的固定相、檢測模式/參數和注射條件。通常，最大的挑戰是開發合適的樣品制備技術，以消除樣品基質中的潛在干擾，并將目標化合物溶解在合適的流動相中。


　　高效液相色譜檢測器


　　分離的化合物將由各種檢測器檢測，包括二極管陣列檢測器(DAD，本質上是紫外-可見分光光度計，允許測量波長相關的吸光度)、蒸發光散射檢測器(ELSD，對幾乎所有化合物不太敏感，比流動相更易揮發)、電導檢測器(通常用于離子色譜)或熒光檢測器。


　　液相色譜-質譜

　　高效液相色譜的一個具體變體是LC-MS，其中質譜儀與高效液相色譜系統耦合，通過色譜分離獲得單一化合物的特定質譜，從而在復雜的樣品基質中實現分子量分析、結構分析和ppb定量。


　　高效液相色譜和氣相色譜-質譜

　　在篩選未知物質時，通常將高效液相色譜與其姊妹方法氣相色譜-質譜進行比較。相比之下，高效液相色譜比氣相色譜-質譜更適合表征分子量和沸點較高的半揮發性和非揮發性有機化合物。


　　高效液相色譜的應用

　　高效液相色譜的應用范圍很廣，包括：
　　原料藥純度和穩定性的評價
　　未知的身份或變形
　　降解產物分析
　　聚合物添加劑分析
　　殘留分析
　　藥物輸送特性
　　賦形劑表征
　　低聚物分析
　　批次對比，樹脂當量，好壞對比
　　痕量雜質/污染物的表征
　　可提取和可提取的物質
　　清潔驗證
　　分子量分析